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    课件:动物细胞融合与单克隆抗体.ppt
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    教学参考 1.已成功的动物细胞融合实例还有哪些? 生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌—鸡 原生质体—血红细胞 1975年 人—胡萝卜 腹水癌细胞—原生质体 1976年 人—小鼠 纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1978年 要知道更多的实例,需经常查阅更多科研报道。 2.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合? 就目前常用的细胞融合方法来看,不管是用物理的、化学的方法,还是生物的方法,其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合,其效率太低,不一定能得到融合细胞。更重要的是,即使两个细胞已发生融合,但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道,体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上,但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,如果仅取一个脾细胞(含B淋巴细胞)和一个瘤细胞杂交,我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的;若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合,就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 3.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养? 融合后的细胞经选择性培养基培养后,能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞,通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释,用多孔细胞培养板培养,使每孔细胞不超过一个,通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体(常用酶联免疫吸附试验法),那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞,挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释,一般需进行3~4次,直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 教学反馈 1.动物细胞融合技术最重要的用途是 ( ) A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 B 2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 (   ) A.B淋巴细胞 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D.杂交瘤细胞 D 3.(多?。?975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是 (  ) A.效应B细胞 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞    D.杂交瘤细胞 A B C D B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破伤风杆菌的实验方案 制备单克隆抗体 不能,没有将抗原注入小鼠体内,无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。 (1).该实验方案的目的是:________________ (2).该方案能达到预期效果吗?为什么? (3).A是从小鼠的脾脏中取得__________ 该细胞能够产生______ 。 (4).图中B为________________过程,常用_________________作为诱导剂,该细胞继承___________的遗传特性,既能__________,又能___________。 (5).C过程指细胞培养,该过程包括________培养和__________培养两个阶段,其中_____代以内的的细胞属于细胞株。 B淋巴细胞 抗体 细胞融合 灭活的病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 50 课后习题 1. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞, 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 ( ) ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞  ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤   C.①②③④   D.②③ C 2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ( ) A.细胞膜的流动性 B.细胞膜

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